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大牛是這樣做成骨細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的！

一、實(shí)材料及試劑培養(yǎng)板、酒精燈、移液槍、CO2培養(yǎng)箱、顯微鏡等MC3T3-E1（前成骨細(xì)二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容試驗(yàn)方法：將MC3T3-E1（前成骨細(xì)胞）細(xì)胞接種于含MEM-α培養(yǎng)基（10%胎牛血清，1%青鏈霉素）的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2，潮濕）培養(yǎng)，每三天更換一次培養(yǎng)液，待細(xì)胞鋪滿瓶底的80%以上時(shí)，用胰蛋白酶消化，加入MEM-α培養(yǎng)基（10%胎牛血清，1%青鏈霉素），將細(xì)胞吹打下來并吸取到10mL離心管中，離心，棄上清，注意不要碰到管口，加入MEM-α培養(yǎng)...

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貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞免疫熒光染色方法

【步驟】(以間接免疫熒光法為例)1細(xì)胞準(zhǔn)備與固定(1)單層生長(zhǎng)細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用0.25%胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞接種到預(yù)先放置幾張6×22mm蓋玻片的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-3天，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層，取出蓋玻片，進(jìn)入PBS(0.01mol/L,pH7.4)洗2次，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇適當(dāng)固定劑固定細(xì)胞。常用固定劑有：95%乙醇(固定時(shí)間10-30min)，丙酮(5-10min)等。(2)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用PBS離心洗滌(1...

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關(guān)于二氧化碳培養(yǎng)箱的幾個(gè)常見問題

二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度（37°C）、穩(wěn)定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對(duì)飽和濕度（95%），來對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置，是細(xì)胞、組織、細(xì)菌培養(yǎng)的一種先進(jìn)儀器，是開展免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備。今天喆圖小編就來給大家解答一下二氧化碳培養(yǎng)箱的幾個(gè)常見問題。1、二氧化碳培養(yǎng)箱的濾器能用多長(zhǎng)時(shí)間?半年到幾年的都有，建議用戶1年更換一次...

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二氧化碳培養(yǎng)箱如何對(duì)CO2濃度進(jìn)行控制

二氧化碳培養(yǎng)箱濃度可以通過紅外傳感器(IR)或熱導(dǎo)傳感器(TC)進(jìn)行測(cè)量。兩種傳感器各有優(yōu)缺點(diǎn)。熱導(dǎo)傳感器：熱導(dǎo)傳感器監(jiān)控CO2濃度的工作原理是基于對(duì)內(nèi)腔空氣熱導(dǎo)率的連續(xù)測(cè)量，輸入CO2氣體的低熱導(dǎo)率會(huì)使腔內(nèi)空氣的熱導(dǎo)率發(fā)生變化，這樣就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)與CO2濃度直接成正比的電信號(hào)。TC控制系統(tǒng)的一個(gè)缺點(diǎn)就是箱內(nèi)溫度和相對(duì)濕度的改變會(huì)影響傳感器的精確度。當(dāng)箱門被頻繁打開時(shí)，不僅CO2濃度，溫度和相對(duì)濕度也會(huì)發(fā)生很大的波動(dòng)，因而影響了TC傳感器的精度。當(dāng)需要精確的培養(yǎng)條件和頻繁開啟二...

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無菌操作在細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵作用

無菌操作是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素，即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室，若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，操作不規(guī)范，也會(huì)導(dǎo)致污染。因此，所有操作都要最大可能的保證無菌，每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和*可靠。1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前：在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品，如二氧化碳培養(yǎng)箱、凈化工作臺(tái)、離心機(jī)等，清點(diǎn)無誤后將其放置操作場(chǎng)所(培養(yǎng)室、超凈臺(tái))內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后，因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。2、無菌操作工作區(qū)...

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細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染原理及實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞復(fù)蘇是將保存在液氮或-80℃冰箱中的細(xì)胞株解凍并重新培養(yǎng)的過程。細(xì)胞復(fù)蘇的關(guān)鍵是快速。防止在解凍過程中，產(chǎn)生的水珠形成冰晶損傷細(xì)胞。細(xì)胞復(fù)蘇一般步驟如下：1.預(yù)先加熱水浴鍋，溫度至37-40℃，并在離心管中準(zhǔn)備好10mL培養(yǎng)基2.從液氮罐或冰箱中取出細(xì)胞，迅速放進(jìn)預(yù)熱的水浴鍋中，鑷子夾住凍存管晃動(dòng)，使其受熱均勻3.當(dāng)凍存管內(nèi)*融化時(shí)，注意用酒精擦拭凍存管消毒，將液體倒入含有10mL培養(yǎng)基的離心管中4.離心5min，去除上清，得到沉淀5.用培養(yǎng)基懸浮沉淀，并接種到培...

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二氧化碳培養(yǎng)箱小課堂

1）對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞在自然的溫度生長(zhǎng)最好，CO2氣體維持在體內(nèi)pH值，類似于在血液中二氧化碳CO2濃度；高濕度能防止培養(yǎng)基的蒸發(fā)；所有這些環(huán)境參數(shù)確保細(xì)胞正常表達(dá)蛋白質(zhì)。適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)環(huán)境對(duì)于敏感的原代細(xì)胞和干細(xì)胞尤其重要。但是每次打開二氧化碳培養(yǎng)箱的門時(shí)，培養(yǎng)箱內(nèi)的條件受到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境影響急劇變化。一旦關(guān)上門，培養(yǎng)箱重新快速恢復(fù)設(shè)置參數(shù)。細(xì)胞是否能長(zhǎng)時(shí)間在設(shè)定條件下生長(zhǎng),取決打開培養(yǎng)箱門的時(shí)間和頻次,培養(yǎng)箱結(jié)構(gòu)和反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)。2）不同的結(jié)構(gòu)和反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)會(huì)導(dǎo)致*不同的恢復(fù)時(shí)間。結(jié)...

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高溫馬弗爐烘爐原因和作用及什么時(shí)候要烘爐

高溫馬弗爐烘爐原因和作用：高溫馬弗爐什么時(shí)候要烘爐？下面喆圖小編依靠專業(yè)知識(shí)匯總了高溫馬弗爐進(jìn)行烘爐的原因和作用。對(duì)高溫馬弗爐進(jìn)行烘爐的原因和作用：高溫馬弗爐，智能馬弗爐等高溫電爐在長(zhǎng)期放置后，高溫馬弗爐內(nèi)部的氧化鋁陶瓷纖維、加熱元件碳化硅、耐火磚等保溫材料吸收空氣中的水分，長(zhǎng)期放置后再次使用我們需要將保溫材料烘干，達(dá)到良好的實(shí)驗(yàn)環(huán)境，提高高溫馬弗爐的使用壽命和精度。如何判斷高溫馬弗爐需要烘爐：高溫馬弗爐何時(shí)需要烘爐？很簡(jiǎn)單，如果廠家沒有進(jìn)行烘爐，需進(jìn)行烘爐處理。長(zhǎng)期擱置后再...

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