一、菌株培養(yǎng)
1、增菌培養(yǎng)
取供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g、ml、10cm2)直接或處理后接種至適量(不少于100ml)的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中,培養(yǎng)48~72小時(shí)。
2、分離培養(yǎng)
取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上,培養(yǎng)24~48小時(shí)(必要時(shí)延長(zhǎng)至72小時(shí))。
二、結(jié)果判斷
1、白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈乳白色偶見淡黃色,表面光滑有濃酵母氣味,培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大,顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出白色念珠菌。
2、如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似,應(yīng)挑選2~3個(gè)菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上,培養(yǎng)24~48小時(shí)(必要時(shí)延長(zhǎng)至72小時(shí))。若平板上無(wú)綠色或翠綠色的菌落生長(zhǎng),判供試品未檢出白色念珠菌。
3、若平板上生長(zhǎng)的菌落為綠色或翠綠色,挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上,培養(yǎng)24~48小時(shí)。取培養(yǎng)物進(jìn)行染色,鏡檢及芽管試驗(yàn)。
4、芽管試驗(yàn) 挑取1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物,接種于加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤(rùn)的平皿內(nèi),置電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)35~37℃、1~3h,置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長(zhǎng)出短小芽管。
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